صفحه محصول - پاورپوینت رنگ آمیزی گرم

پاورپوینت رنگ آمیزی گرم (pptx) 30 اسلاید

دسته بندی : پاورپوینت

نوع فایل : PowerPoint (.pptx) ( قابل ویرایش و آماده پرینت )

تعداد اسلاید: 30 اسلاید

قسمتی از متن PowerPoint (.pptx) :

بنام خدا 1 رنگ آمیزی گرم 2 مقدمه این روش رنگ آمیزی در سال 1884 توسط هانس کریستین گرم معرفی شد و به افتخار این باکتری شناس دانمارکی به این نام خوانده می شود. بر اساس آن باکتری ها به دو دسته گرم منفی و گرم مثبت تقسیم می شوند. رنگ آمیزی گرم برای طبقه بندی یا تمایز باکتری ها از همدیگر بسیار ضروری است. رنگ آمیزی گرم از انواع رنگ آمیزی افتراقی محسوب می شود. 3 1- رنگ اولیه (Primary stain) : کریستال ویوله (Crystal Violet) : رنگی بنفش است که در اولین مرحله مورد استفاده قرار گرفته و همه باکتری ها بنفش رنگ خواهند شد. 2- رنگ دندانه (Mordant) لوگل گرم (Gram Iodine) : از لوگل به عنوان رنگ موردانت استفاده می شود چون میل ترکیبی سلول های باکتریال را برای اتصال و حفظ رنگ اولیه افزایش می دهد. مکانیسم آن : پس از اتصال به کریستال ویوله (رنگ اولیه)، کمپلکس نامحلولی از کریستال ویوله و ید (CV-I) تشکیل می شود و این کمپلکس باعث تشدید اتصال رنگ به سلول های باکتریایی می گردد. در این مرحله همه سلول های باکتریایی به رنگ بنفش تیره مشاهده می شد. 4 3- معرف رنگ بر:(Decolorizing agent) الکل اتیلیک 95% و استن یا الکل-استن: عملکرد الکل از 2 جنبه حائز اهمیت است. 1- حلال چربی 2- آب گیری از پروتئین ها چگونگی تأثیر آن به دو عامل بستگی دارد : 1- غلظت مواد لیپیدی 2- ضخامت لایه پپتیدوگلیکان دیواره باکتری ها 5 تأثیر رنگ بر در باکتری های گرم منفی: در باکتری های گرم منفی الکل لیپیدهای غشا خارجی را در خود حل کرده و باعث افزایش منافذ موجود در دیواره سلولی می شود. بدین ترتیب کمپلکس CV-I به سهولت از لایه ظریف و سست پپتیدوگلیکان جدا می گردد. بنابراین الکل باعث تسهیل آزاد سازی کمپلکس CV-I شده و باکتری ها رنگ اولیه خود را از دست می دهند. در نتیجه در این مرحله باکتری ها به صورت بیرنگ به جا خواهند ماند. تأثیر رنگ بر در باکتری های گرم مثبت: لایه بسیار ضخیم پپتیدوگلیکان در باکتری های گرم مثبت عامل اصلی حفظ و نگهداری کمپلکس CV-I است. همچنین منافذی که بواسطه تأثیر الکل در دیواره ایجاد می گردند بسیار کوچک تر از منافذ تشکیل شده در دیواره باکتری های گرم منفی بوده و بنابراین کمپلکس رنگ اولیه که محکم به دیواره متصل شده به سختی از آن جدا خواهد شد. در این شرایط باکتری ها رنگ اولیه را همچنان حفظ کرده و به رنگ بنفش باقی خواهند ماند. 6 4- رنگ مخالف:( counter stain) سافرانین (Safranin) : باکتری هایی که در مرحله رنگ بری رنگ خود را از دست داده اند تحت تأثیر سافرانین به رنگ قرمز در می آیند. بنابراین باکتری های گرم منفی به رنگ قرمز و باکتری های گرم مثبت به رنگ بنفش مشاهده خواهند شد. 7 آماده سازی لام جهت گسترش 1- تهيه گسترش: بهترين گسترش از كشت 24-18 است (کشت جوان). در کشت های کهنه ممکن است باکتری به صورت کاذب گرم منفی دیده شود. در صورت برداشت از كلني جامد، در ابتدا يك قطره سرم فيزيولو‍‍‍ژي یا آب مقطر روي لام قرار مي دهيم. كلوني باكتري ها را در آن حل مي نماييم. گسترش را به اندازه يك سكه روی لام پخش می کنیم. 2- خشك شدن گسترش: اجازه مي دهيم گسترش در معرض هوا خشك شود یا لام را در دستگاه لام خشک کن قرار می دهیم. در این مرحله نباید از شعله جهت خشک کردن لام استفاده کرد. 3- فيكس كردن نمونه روی لام: لام را دو تا سه مرتبه از قسمت میانی شعله عبور مي دهيم. از حرارت زیاد و متمرکز باید اجتناب نمود. در این مرحله حرارت موجب انعقاد پروتئین های نمونه شده و باعث چسبیدن آن به سطح شیشه ای لام می شود. 8 9